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hpce是什么色谱法?

毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)又称高效毛细管电泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE),是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。毛细管电泳实际上包含电泳、色谱及其交叉内容,它使分析化学得以从微升水平进入纳升水平,并使单细胞分析,乃至单分子分析成为可能。长期困扰我们的生物大分子如蛋白质的分离分析也因此有了新的转机。

延伸阅读

毛细管电泳的基本工作原理是什么,毛细管的长度不同对分离结果有什么影响?

【毛细管电泳】是以X石英毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。

【所用设备】主要部件有0~30kV可调稳压稳流电源,内径小于100μm(常用50~75μm)、长度一般为30~100cm的X石英毛细管、电极槽、检测器和进样装置。

检测器有紫外/可见分光检测器、激光诱导荧光检测器和电化学检测器,前者最为常用。

进样方法有电动法(电迁移)、压力法(正压力、负压力)和虹吸法。

成套仪器还配有自动冲洗、自动进样、温度控制、数据采集和处理等部件。

毛细管电泳所用的石英毛细管柱,在pH值>3的情况下,其内表面带负电,与缓冲液接触时形成双电层,在高压电场作用下,形成双电层一侧的缓冲液由于带正电而向负极方向移动,从而形成电渗流。

同时,在缓冲溶液中,带电粒子在电场作用下,以各自不同速度向其所带电荷极性相反方向移动,形成电泳。

带电粒子在毛细管缓冲液中的迁移速度等于电泳和电渗流的矢量和。

各种粒子由于所带电荷多少、质量、体积以及形状不同等因素引起迁移速度不同而实现分离。

目前,毛细管电泳的分离模式有以下几种。

(1)毛细管区带电泳,用以分析带电溶质。

为了降低电渗流和吸附现象,可将毛细管X涂层。

(2)毛细管凝胶电泳,在毛细管中装入单体,引发聚合形成凝胶,主要用于测定蛋白质、DNA等大分子化合物。

另有将聚合物溶液等具有筛分作用的物质,如葡聚糖、聚环氧乙烷,装人毛细管中进行分析,称毛细管无胶筛分电泳,故有时将此种模式总称为毛细管筛分电泳,下分为凝胶和无胶筛分两类。

(3)胶束电动毛细管色谱,在缓冲液中加入离子型表面活性剂如十二烷基X钠,形成胶束,被分离物质在水相和胶束相(准固定相)之间发生分配并随电渗流在毛细管内迁移,达到分离。

本模式能用于中性物质的分离。

(4)亲和毛细管电泳,在毛细管X涂布或在凝胶中加入亲和配基,以亲和力的不同达到分离目的。

(5)毛细管电色谱,是将HPLC的固定相填充到毛细管中或在毛细管X涂布固定相,以电渗流为流动相驱动力的色谱过程,此模式兼具电泳和液相色谱的分离机制。

(6)毛细管等电聚焦电泳,是通过X涂层使电渗流减到最小,再将样品和两性电解质混合进样,两个电极槽中分别为酸和碱,加高电压后,在毛细管内建立了pH梯度,溶质在毛细管中迁移至各自的等电点,形成明显区带,聚焦后用压力或改变检测器末端电极槽储液的pH值使溶质通过检测器。

(7)毛细管等速电泳,采用先导电解质和后继电解质,使溶质按其电泳倘度不同得以分离。

以上各模式以(1)、(2)、(3)种应用较多。

电极槽和毛细管内的溶液为缓冲液,可以加入有机溶剂作为改性剂,以及加入表面活性剂,称作运行缓冲液。

运行缓冲液使用前应脱气。

电泳谱中各成分的出峰时间称迁移时间。

胶束电动毛细管色谱中的胶束相当于液相色谱的固定相,但它在毛细管内随电渗流迁移,故容量因子为无穷大的成分最终也随胶束流出。

其他各种参数都与液相色谱所用的相同。

一、对仪器的一般要求 所用的仪器为毛细管电泳仪。

正文中凡采用毛细管电泳法测定的品种,其所规定的测定参数,除分析模式、检测方法(如紫外光吸收或荧光检测器的波长、电化学检测器的印加电位等)应按照该品种项下的规定外,其他参数如毛细管内径、长度、缓冲液的pH值、浓度、改性剂添加量、运行电压或电流的大小、运行的时间长短、毛细管的温度等,均可参考该品种项下规定的数据,根据所用仪器的条件和预试验的结果,进行必要的调整。

二、系统适用性试验 同高效液相色谱法项下,按各品种项下的要求,进行预试验,并调节各运行参数使达到规定指标,方可正式测定。

三、测定法 同高效液相色谱法项下。

目前毛细管电泳仪的进样精度较高效液相色谱法低,定量分析时以用内标法为宜。

毛细管电泳法主要用于分离哪些物质?

毛细管区带电泳(Capillary Zone Electrophoresis, CZE)最常见的模式,用以分析带电溶质。样品中各个组分因为迁移率不同而分成不同的区带。

为了降低电渗流和吸附现象,可将毛细管X做化学修饰。毛细管凝胶电泳(Capillary Gel Electrophoresis,CGE)毛细管凝胶电泳,在毛细管中装入单体,引发聚合形成凝胶,主要用于测定蛋白质、DNA等大分子化合物。

另有将聚合物溶液等具有筛分作用的物质,如葡聚糖、聚环氧乙烷,装入毛细管中进行分析,称毛细管无胶筛分电泳,故有时将此种模式总称为毛细管筛分电泳,下分为凝胶和无胶筛分两类。

胶束电动毛细管色谱(Micellar Electrokinetic Capillary Electrophoresis,MECE)胶束电动毛细管色谱,在缓冲液中加入离子型表面活性剂如十二烷基X钠,形成胶束,被分离物质在水相和胶束相(准固定相)之间发生分配并随电渗流在毛细管内迁移,达到分离。本模式能用于中性物质的分离。

亲和毛细管电泳 (Affinity Capillary Electrophoresis, ACE)亲和毛细管电泳,在毛细管X涂布或在凝胶中加入亲和配基,以亲和力的不同达到分离目的。毛细管电色谱 (Capillary Electrochromatography, CEC)毛细管电色谱,是将HPLC的固定相填充到毛细管中或在毛细管X涂布固定相,以电渗流为流动相驱动力的色谱过程,此模式兼具电泳和液相色谱的分离机制。毛细管等电聚焦电泳(Capillary Isoelectric Focusing,CIEF)毛细管等电聚焦电泳,是通过X涂层使电渗流减到最小,再将样品和两性电解质混合进样,两个电极槽中分别为酸和碱,加高电压后,在毛细管内建立了pH梯度,溶质在毛细管中迁移至各自的等电点,形成明显区带,聚焦后用压力或改变检测器末端电极槽储液的pH值使溶质通过检测器。毛细管等速电泳(Capillary Isotachophoresis, CITP)毛细管等速电泳,采用先导电解质和后继电解质,使溶质按其电泳倘度不同得以分离。 以上各模式以CZE、CGE、MECE三种应用较多。

毛细管电泳的分离模式有哪几种?

  采用胶束电动毛细管色谱法(MEKC),MEKC弥补了毛细管区带电泳(CZE)分离模式的不足,在电渗和电泳的共同作用下达到分离,SDS等),还可以测定中性物质。  通常要向缓冲溶液中加入离子型表面活性剂(如十二烷基X钠,当缓冲液中表面活性剂浓度超过其自身的临界胶束浓度时就会形成胶束(准固定相),这使得中性物质的分离成为可能,也大大拓宽了毛细管电泳技术的应用范围。各组分由于其疏水性强弱的差异而在胶束与水相中分配系数各异。在MEKC分离模式中,它不仅可以分析荷电离子,即根据分配差异。

ce-sds分离原理?

ce-sds非还原法分离原理,

毛细管电泳是以高压直流电场为驱动力,以毛细管为分离通道。毛細管內先填充凝胶,此时凝胶会在毛細管內形成分子筛,样品依分子量的大小在毛細管內移动速度不同而进行分离,能够有效减小组分扩散,所得峰型尖锐,分离效率高。 CE-SDS(非还原) 仪器组成 毛细管电泳系统的基本结构包括进样、填灌/清洗、电流回路、毛细管/温度控制、检测/记录/数据处理等部分。 CE-SDS(非还原) 检测器 CE-SDS(非还原) 进样方式 1. 流体力学进样方式 (1)进样端加压 (2)出口端抽真空 (3)虹吸进样 进样量:毛细管长度的1%-2%;nL级、非常小; 2. 电动进样方式毛细管一端插入样品瓶,加电压。 3. 扩散进样 试样通过扩散作用进入分离柱端口处。 CE-SDS(非还原) 工作电压的确定 1、在电泳条件下,改变电压(或电流)测定对应的电流(或电压) 2、做电压~电流曲线 3、取线性关系中的最大电压(或电流),作为分离电压(或电流)。线性以上的电压,焦耳热效应过大,一般不宜选用。但如果分离效率很高,就可以选用,以便加快分离速度。在做CGE时,电场强度应控制在150~400V/cm之间,否则容易导致凝胶的破坏。 电泳温度的选择 电泳温度的选择,主要是指毛细管外表温度的选择与控制。温度变化不仅影响分离的重现性,而且影响分离效率。温度选择应考虑:热效应控制、重现性控制、分离效率控制盒分离介质对温度的限制等因素。多数情况下,在20~30℃之间进行电泳,就能获得良好的分离结果。 各试剂的作用 SDS-MW Sample Buffer: 由于蛋白是两性的,与SDS结合会使蛋X负电荷,使其在毛细管中往正极方向移动。

毛细管电泳的结果分析?

毛细管电泳是一种用于分离和定性分析生物分子的常用技术,主要是利用毛细管内的电场将各种大小不同的DNA或蛋白质分子进行分离,从而获得各种分子的分子量大小信息。毛细管电泳的结果分析主要是通过比较实验结果和理论结果,分析出实验样品中的分子特征,从而获得实验样品的结构性、组成性以及相关信息。

首先,分析毛细管电泳的结果需要仔细观察毛细管中的分子移动情况。通过观察,可以看出毛细管中分子的移动和分离情况,从而判断出实验样品中的分子大小和种类。其次,根据实验样品中不同大小的分子移动的位置,以及毛细管内电场的强度和方向,可以计算出实验样品中分子的大小和组成。最后,可以使用特定的软件进行实验数据的处理和分析,进一步分析毛细管电泳的结果,从而获得实验样品的结构性、组成性以及相关信息。


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